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miRNA靶基因驗證

達為科優勢:


    采用化學合成的miRNA mimics,亦可構建pri-miRNA表達載體螢火蟲螢光素酶和海腎螢光素酶對應不同的反應底物,反應中沒有的交叉干擾。

原理

    當miRNAs與靶基因的3’ UTR結合后,主要抑制mRNA的翻譯,可以Western Blot檢測靶蛋白的表達水平;也有部分表現為對標靶mRNA的降解,可以采用qRT-PCR進行檢測。但無論那一種方法,都不能有效說明是miRNAs直接作用的結果。直接的證據在于Sensor reporter的構建與活性檢測。將miRNA靶基因的3’UTR克隆到含雙熒光素酶報告基因載體的熒光素酶基因下游。如果miRNA與克隆的3’UTR靶標相互作用,通過測定兩種熒光素酶的活性比值可以獲得miRNA對靶標調控作用的結果。方便簡單地應用于miRNA與基因的檢測、全基因組范圍內miRNA對基因的檢測和陽性作用位點的突變檢測。

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