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TA克隆
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TA克隆 其它品牌

TA克隆是把PCR產物片斷與一個具有3’T突出的載體連接起來的方法,PCR中所適用的聚合酶具有末端轉移的活性,通常會在3端加上A。PCR過程中,有時并不清楚目的基因的DNA序列,獲得的目的片斷通常需要通過TA克隆的方法,重組到T-載體中,通過測序弄清楚DNA序列。

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TA克隆

TA克隆方法(TA Cloning):把PCR片斷與一個具有3-T突出的載體DNA連接起來的方法。因為PCR反應中所適用的聚合酶具有末端轉移的活性,通常在3加上A。例如:Taq聚合酶同時具有的末端連接酶的功能,PCR反應時在每條PCR擴增產物的3端自動添加一個3-A突出端。只有用經過特殊處理的具有3-T突出末端的DNA的片斷才能通過T/A配對進行連接。

通過PCR的方法擴增目的基因片斷的過程中,由于往往不清楚目的基因的DNA序列,獲得的目的片斷通常需要通過TA克隆的方法,重組到T-載體中,通過序列測定清楚DNA序列。由于在PCR過程中,使用的DNA聚合酶不同,往往分為2種情況:(1)使用不同的Taq酶,在PCR擴增循環結束后,加上72℃ 10分鐘一個過程,Taq酶可以在擴增產物的3末端加上A,因此PCR產物回收純化后可以和T載體直接連接。(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在擴增產物的3末端加上A,得到的DNA序列為鈍端,因此,需要在回收純化后進行加A的過程,通常是以PCR回收產物為模板,加上量的普通Taq酶和反應液,加入dATP(或dNTP),72℃10分鐘,然后將加A產物直接用于TA連接。

TA克隆實驗材料要求:未純化的PCR產物及PCR電泳圖片,PCR擴增引物序列PCR擴增用酶,如果使用含3'→5'外切酶活性的聚合酶,請提供PCR引物,我們將重新擴增PCR產物以能進行TA克隆操作。

TA克隆服務說明 
1、PCR產物TA克隆實驗中,PCR片段越大,TA克隆難度越大;2、TA克隆實驗中,我們使用的是大家常用 T載體作為標準T載體,如果對載體有特殊要求,請再實驗之前告知客戶服務人員。

如果您對我們的TA克隆感興趣或有疑問,你可以通過網頁咨詢我們的在線客服,或致電:18017844061,我們將熱情為您服務。

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