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iTRAQ
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iTRAQ 其它品牌

iTRAQ( Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation)和TMT( Tandem Mass Tag)分別是由AB SCIEX和Thermofisher開發的、用于標記肽段并結合LC-MS實現對多個樣品的蛋白質組進行相對定量的試劑盒。iTRAQ有4標和8標兩種規格,TMT有2標、6標和10標等三種規格。

iTRAQ
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iTRAQ

背景簡介:


iTRAQ和TMT的技術原理一樣,所不同的是二者的分子結構有差異。與SILAC相比(標記蛋白質),iTRAQTMT是對肽段進行標記的。依據iTRAQ/TMT標簽的質量數差異,通過MS實現對多組樣品中的蛋白質進行相對定量:

SILAC是通過MS( MSl)對蛋白質進行定量,而iTRAQ/TMT是通過二級MS( MS/MS.MS2)進行定量的;

iTRAQ/TMT能兼容所有來源的蛋白質樣品,并且能同時分析多達8-10組的樣品,分析通量高。

試驗流程

1、分別提取蛋白質并定量;

2、Trypsin分別對蛋白進行酶解,提取肽段;

3、用不同質量數的iTRAQ/TMT標簽分別對肽段樣品進行標記:

4、標記完成后,混合樣品,用SCX進行組分分離(15-20組分);

5、對每個組分進行LC-MS分析:

6、蛋白質鑒定與定量分析,篩選差異表達的蛋白;

7、生物學實驗驗證(Western blot,EUSA等):



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