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SILAC
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SILAC( Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)技術是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩定同位素,沒有放射性,因此可以在常規條件下進行試驗。

SILAC
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背景簡介:

    SILAC( Stable Isotope  Labeling with   Amino acids in  Cell culture)技術是依據細胞生長對必需氨基酸的依賴原理,利用穩定同位素標記( 13C,15N,2H)的必需氨基酸對細胞蛋白質組進行代謝標記的方法;13C,15N,2H是穩定同位素,沒有放射性,因此可以在常規條件下進行試驗。

    Arg(R)、Lys(K)、Leu(L)是SILAC常用的氨基酸。將(13C,15N,2H)等穩定同位素標記的R、K、L加入細胞培養基中,在細胞進
行蛋白質合成時,這些穩定同位素標記的氨基酸自然被“摻入”到蛋白質中。通過>6代的細胞增殖,整個細胞的蛋白質組會被

穩定同位素氨基酸”標記”;

     SILAC“標記”了蛋白質與“未標記”的蛋白質(普通培養基培養)存在數目的質量差異,該質量差異在后續LC-MS的一

級質譜( MSl)中呈現一對同位素質譜峰,通過質譜峰的信號強度能實現對2組樣品中每一個蛋白質表達水平的相對定量,
終能確定蛋白質表達水平差異(差異蛋白質組學分析)和區分特異性和非特異性相互作用(蛋白質相互作用分析);同時通
過二級質譜( MS/MS,MS2)實現對樣品中蛋白質的鑒定。
     SILAC技術結合LC-MS能同時實現對2組樣品中蛋白質的定性和定量分析。實驗技術“高、大、上“,定量,通過定墨信息能直接反映出樣品之間的蛋白質表達水平差異,便于快速找到感興趣的目標分子。同時,利用SILAC技術,能明顯提高文章的

檔次。

SILAC氨基酸對照表:


SILAC實驗設計:








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